昆虫学报

作者：幸晓清,李泉润,陈斌,司风玲

单位：重庆师范大学生命科学学院昆虫与分子生物学研究所, 媒介生物控制和利用重庆市重点实验室, 重庆 401331

关键词：中华按蚊,保幼激素环氧水解酶,基因克隆,表达模式,RNA干扰,生殖调控

【目的】保幼激素环氧水解酶(juvenile hormone epoxide hydrolase, JHEH)作为保幼激素代谢通路的关键酶，在昆虫生长发育和生殖调控中起着重要的作用。中华按蚊Anopheles sinensis是疟疾等重要疾病的主要传播媒介，目前对于其JHEH基因在中华按蚊中的作用尚不清楚。本研究旨在解析中华按蚊JHEH的分子特性和基因表达模式，探究JHEH在中华按蚊生殖中的作用。【方法】基于中华按蚊转录组和基因组数据，利用PCR技术扩增中华按蚊AsJHEH的cDNA序列；通过生物信息学工具解析预测AsJHEH的理化特性和结构特征，使用MAGE11.0构建系统进化树；利用RT-qPCR检测AsJHEH在中华按蚊不同发育阶段(卵、1-4龄幼虫、雌蛹、雄蛹和雌雄成虫；化蛹后0, 10, 20和30 h，末期雌蛹以及羽化后0, 6, 12, 24, 36, 48, 60和72 h的雌成虫)、雌雄成虫不同组织(头、胸和腹)、雌成虫不同组织(中肠、马氏管、脂肪体、卵巢和体壁)中的表达量；构建pET32a-AsJHEH原核表达载体，诱导蛋白表达并纯化重组蛋白，制备AsJHEH多克隆抗体；向中华按蚊末期雌蛹注射dsAsJHEH进行RNAi后通过RT-qPCR和Western blotting检测基因沉默效率，并观测中华按蚊成虫羽化率、卵巢发育和单雌产卵量以及羽化后吸血24和48 h成虫中AsVg的表达量。【结果】成功克隆获得中华按蚊AsJHEH cDNA序列(GenBank登录号: PV466834)，长为1 389 bp，编码462个氨基酸，编码蛋白质的预测分子质量为53.02 kD，等电点(isoelectric point, pI)为6.20。AsJHEH含有保守的结构基序，包括催化三联体(Asp234-Glu411-His438)、氧离子孔(Tyr306和Tyr81)以及XWG和HGXP基序。AsJHEH与其他蚊科昆虫JHEH的亲缘关系最近。时空表达模式发现， AsJHEH在中华按蚊各个发育阶段和成虫组织中均有表达，在2龄幼虫中表达量最高，是雌成虫中表达量的888.98倍；在雄成虫头部中高表达，表达量为雌成虫卵巢中表达量的1 198.54倍。通过原核表达系统成功制备了AsJHEH重组蛋白，并获得多克隆抗体效价为1∶128 000。与注射dsEGFP的对照组比较，AsJHEH RNAi后，AsJHEH在中华按蚊mRNA水平和蛋白水平的表达量均显著下降，中华按蚊羽化率下降了26.67%，同时卵巢发育异常，羽化后吸血48 h成虫中AsVg的表达量上调了1.8倍，单雌产卵量降低了52.23%，且所产的卵长度增加了0.2倍并丧失了孵化能力。【结论】本研究首次揭示了AsJHEH在中华按蚊生长发育和生殖调控中具有关键作用，不仅为基于保幼激素降解通路的中华按蚊防治奠定了理论基础，更为研发基于JH代谢的蚊虫生物防治策略提供了潜在分子靶点，具有重要的理论意义与实践价值。

来源：2026年第2期

《昆虫学报》期刊编辑部

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