昆虫学报

作者：李鑫,李辉,李立梅,杨力凤,孟凡泽,褚栋,付海滨

单位：1. 大连海关技术中心, 大连 116000; 2. 东港海关综合技术服务中心, 丹东 118300;3. 吉林省林业科学研究院, 长春 130000; 4. 青岛农业大学植物医学学院, 青岛 266109;5. University of Minnesoda, Twin Cities, Twin 55455, Unites States of America;6. 沈阳海关技术中心, 沈阳 110000

关键词：大洋臀纹粉蚧,南洋臀纹粉蚧,木瓜秀粉蚧,分子鉴定,分子标记,微滴式数字PCR

【目的】应用微滴式数字PCR(droplet digital PCR，ddPCR)技术，建立大洋臀纹粉蚧Planococcus minor、南洋臀纹粉蚧Pl. lilacinus和木瓜秀粉蚧Paracoccus marginatus 3种高频截获检疫性粉蚧多重精准检测方法。【方法】以口岸截获和国内采集的常见粉蚧大洋臀纹粉蚧、南洋臀纹粉蚧、木瓜秀粉蚧、新菠萝灰粉蚧Dysmicoccus neobrevipes、杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi、木槿曼粉蚧Maconellicoccus hirsutus、康氏粉蚧Ps. comstocki和桔臀纹粉蚧Pl. citri为参试材料，选择COⅠ基因序列为靶标，使用GenBank 数据库、 MEGA11和Beacon Designer 8等进行同源性比对和特异性引物与探针设计;在构建的大洋臀纹粉蚧、南洋臀纹粉蚧和木瓜秀粉蚧 3种粉蚧单重ddPCR检测体系的基础上，通过筛选最佳引物和探针浓度优化反应体系，建立可同时快速、绝对定量检测大洋臀纹粉蚧、南洋臀纹粉蚧和木瓜秀粉蚧基因组拷贝数的多重ddPCR检测方法，并与TaqMan qPCR方法进行比较，测定该方法的灵敏度、定量限及准确性。【结果】构建的多重ddPCR检测体系内各组引物和探针对目标粉蚧基因组均能扩增，未出现交叉反应， DNA最低检测浓度与TaqMan qPCR中的一致。这一多重ddPCR体系对大洋臀纹粉蚧基因组的绝对定量检测低限为0.44拷贝/μL，对南洋臀纹粉蚧基因组的绝对定量检测低限为0.43拷贝/μL，对木瓜秀粉蚧基因组的绝对定量检测低限为0.44拷贝/μL。在定量检测范围内这一多重ddPCR体系定量检测的线性决定系数R2均大于0.99，且重复性和线性相关性较好。【结论】本研究建立的多重ddPCR检测方法可实现对3种高频截获检疫性粉蚧大洋臀纹粉蚧、南洋臀纹粉蚧和木瓜秀粉蚧快速、精准鉴定，为口岸外来有害生物防控和保护我国生态安全提供技术服务和支持。

来源：2026年第2期

《昆虫学报》期刊编辑部

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