昆虫学报

作者：安玲娜,李卓俞,张艳,郭鹏超,郭凯雨,刘文月,董照明,赵萍

单位：1. 陆军军医大学第三军医大学第二附属医院血液病医学中心， 重庆 400038;2. 西南大学前沿交叉学科研究院生物学研究中心， 重庆 400715

关键词：家蚕,病原体相关分子模式,Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂7,细胞免疫,吞噬作用

【目的】阐明Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂7(serine protease inhibitor Kazal-type 7, SPINK7)的生物学功能及其在家蚕Bombyx mori抵抗细菌侵染中的免疫识别机制。【方法】对家蚕SPINK7蛋白进行生物信息学分析和原核表达；利用圆二色谱分析SPINK7的二级结构及其耐热性；利用非还原性电泳及Western blot检测SPINK7的聚体形成趋势；利用大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus分别侵染家蚕5龄幼虫，利用qPCR和Western blot分别检测SPINK7基因在血细胞和脂肪体中的表达量及SPINK7在血清中的蛋白含量；通过细菌抑制曲线分析SPINK7对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌Micrococcus luteus的抑菌活性；通过免疫荧光定位和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测SPINK7与肽聚糖和脂多糖等病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns, PAMPs)的结合，以及SPINK7与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的结合。【结果】SPINK7由3个保守的Kazal结构域组成，各结构域含有6个半胱氨酸，分别形成3对二硫键；二级结构主要为α螺旋结构，与Kazal结构域典型二级结构一致，耐热性好，且在80 ℃时结构依然较为稳定。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌诱导后，SPINK7会形成多聚体结构，并在家蚕5龄幼虫的血细胞和脂肪体中的表达量以及在血清中的蛋白含量均比磷酸缓冲液(PBS)对照组发生显著上调。SPINK7并非直接抑制细菌活性，而是通过与细菌PAMPs结合并促使细菌聚集。【结论】SPINK7是一种Kazal型的免疫相关蛋白，其在家蚕受到细菌侵染后表达上调并形成多聚体，通过识别并结合细菌PAMPs帮助家蚕血细胞聚集细菌并发挥免疫效应。

来源：2025年第9期

《昆虫学报》期刊编辑部

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