昆虫学报

作者：张艺琼,李琪明,董舒楠,王宁,康婧,宓诗雨,吴鹰,蒋海宾,陈大福,郭睿

单位：1. 福建农林大学蜂学与生物医药学院, 福州 350002; 2. 天然生物毒素国家地方联合工程实验室, 福州 350002;3. 福建农林大学蜂疗研究所, 福州 350002; 4. 吉林省养蜂科学研究所, 吉林 132013

关键词：意大利蜜蜂,piRNA,piR-ame-1128833,中肠,卵巢,精巢,靶基因

【目的】本研究旨在揭示意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica成年工蜂中肠中piR-ame-1128833的调控网络和功能，为探明其作用机制提供基础。【方法】通过stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证piR-ame-1128833在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中的表达和序列真实性。使用相关生物信息学软件预测piR-ame-1128833的靶mRNA并进行GO和KEGG数据库注释。通过RT-PCR和Sanger测序对piR-ame-1128833的关键靶基因Wnt-1和LAMP-1在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中的表达进行验证。通过双荧光素酶报告基因试验验证piR-ame-1128833与关键靶基因Wnt-1和LAMP-1的结合关系。饲喂刚出房的1日龄工蜂成虫piR-ame-1128833的模拟物(mimic-piR)和阴性对照(mimicNC)后，采用RTqPCR检测工蜂成虫中肠中piR-ame-1128833的相对表达量及过表达piR-ame-1128833后关键靶基因Wnt-1和LAMP-1的相对表达量。【结果】piR-ame-1128833在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中存在和表达； piR-ame-1128833靶向3 021条mRNA，可注释到代谢进程和催化活性等45条GO条目及溶酶体和MAPK信号通路等318条KEGG通路；有51条靶mRNA涉及Wnt, mTOR, Hippo, AMPK, Hedgehog, MAPK和JAK-STAT等7条生长发育相关信号通路，有53条靶mRNA涉及2条体液免疫通路(MAPK和JAKSTAT信号通路)与3条细胞免疫通路(内吞作用、溶酶体和吞噬体)；靶基因Wnt-1和LAMP-1在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中表达；piR-ame-1128833与靶基因Wnt1和LAMP1之间存在结合关系；相较于mimic-NC饲喂组，piR-ame-1128833的表达量在mimic-piR饲喂组2和5日龄成年工蜂中肠中极显著上调，在3和4日龄成年工蜂中肠中显著上调；过表达piR-ame-1128833后， Wnt-1的表达量在3日龄成年工蜂中肠中极显著下调，在2, 4和5日龄成年工蜂中肠中显著下调； LAMP-1的表达量在3, 4和5日龄成年工蜂中肠中极显著下调，在2日龄成年工蜂中肠中显著下调。【结论】piR-ame-1128833在意大利蜜蜂成年工蜂中肠、成年蜂王卵巢和成年雄蜂精巢中表达，通过饲喂mimic-piR能实现成年工蜂中肠中piRame1128833的高效过表达，成年工蜂中肠中piR-ame-1128833通过负调控Wnt-1和LAMP-1的表达发挥潜在作用。

来源：2025年第1期

《昆虫学报》期刊编辑部

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