昆虫学报

作者：刘卓,孙妍妍,仝子乾,石慧轩,阚云超,乔惠丽

单位：1. 南阳师范学院生命科学学院, 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室, 南阳 473061;2. 河南科技学院资源与环境学院, 新乡 453003

关键词：家蚕,miRNA,精巢,卵巢,蜕皮激素,发育调控

【目的】miRNAs不仅调控昆虫的变态发育过程，在昆虫的生殖调控中也发挥重要作用。本研究旨在通过对家蚕Bombyx mori生殖调控相关miRNA(Bmo-miR-2763)的靶基因进行鉴定和表达分析，揭示miRNA在家蚕精巢和卵巢发育调控中的潜在分子机制。【方法】利用生物信息学方法预测Bmo-miR-2763的靶基因；利用qRT-PCR检测每头家蚕5龄幼虫血淋巴中注射5 μg 20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone, 20E)后2, 6, 12和24 h时Bmo-miR-2763及其预测靶基因Bmo-GRF在脂肪体中的表达量；并利用qRT-PCR检测Bmo-miR-2763及其预测靶基因BmGRF在20E处理24 h时5龄幼虫不同组织(血淋巴、表皮、中肠、头、脂肪体、丝腺、马氏管、精巢和卵巢)以及未处理的正常家蚕4-5龄幼虫、蛹和成虫中的表达量；双荧光酶报告载体系统分析Bmo-miR-2763与其预测靶基因BmGRF的互作。【结果】与对照组相比，20E处理后家蚕5龄幼虫脂肪体中Bmo-miR-2763的表达量显著升高；Bmo-miR-2763的预测靶基因BmGRF也显著上调。Bmo-miR-2763和BmGRF在20E处理后24 h时家蚕5龄幼虫精巢和卵巢中都有较高表达量，且二者在精巢中的表达趋势一致，在卵巢中表达趋势相反；BmGRF在未处理正常家蚕不同发育阶段的表达量变化与Bmo-miR-2763的表达量呈负相关。双荧光素酶活性检测结果显示，Bmo-miR-2763模拟物和BmGRF 3′UTR过表达载体共转染时，荧光素酶活性下降56%，表明Bmo-miR-2763可与靶基因BmGRF 3′UTR区的互作抑制其在翻译水平的表达。【结论】 20E可诱导家蚕Bmo-miR-2763的表达，Bmo-miR-2763可通过调控靶基因BmGRF参与家蚕卵巢的发育调控。

来源：2024年第10期

《昆虫学报》期刊编辑部

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