昆虫学报

作者：傅媛媛,沈苏林,孟国强,刘倩倩,樊伟康,韦有恒

单位：扬州大学生物科学与技术学院, 扬州 225009

关键词：果蝇,自噬,Ras家族蛋白,RagGTPase,基因敲除

【目的】Rag GTPase是真核生物中高度保守的Ras家族蛋白，在调节雷帕霉素靶点复合体1(mechanic target of rapamycin complex 1, mTORC1)活性和自噬等方面发挥重要作用。为了研究Rag GTPase的生理功能，本研究构建了RagA基因编码区缺失的突变黑腹果蝇Drosophila melanogaster，对其表型进行分析。【方法】将靶向RagA基因的gRNA表达质粒导入表达Cas9蛋白的黑腹果蝇中，随后通过PCR方法筛选获得RagA编码区缺失的RagA突变黑腹果蝇；利用遗传杂交的方法对腹果蝇RagA突变体的生殖及存活情况进行分析；利用FLP-FRT系统分别在脂肪体和雌性卵巢中诱导产生RagA突变的细胞克隆，分别分析RagA突变细胞生长和自噬水平的改变。【结果】利用CRISPR-cas9结合显微注射技术成功敲除RagA基因；RagA突变导致黑腹果蝇在胚胎期死亡，在细胞水平上使细胞生长明显降低、细胞内LAMP1和Rab7标记的自噬溶酶体堆积。【结论】本研究验证了RagA基因调节细胞代谢的功能，为进一步利用RagA突变果蝇研究RagA基因在发育中的功能分析和机制解析奠定基础。

来源：2024年第9期

《昆虫学报》期刊编辑部

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