昆虫学报

作者：税良勇,赵忠祎,冯印,谢晓倩,袁晓琴,毛新芳,刘忠渊

单位：四川轻化工大学化学工程学院, 自贡 643000

关键词：茶尺蠖,羧酸酯酶,原核表达,酶活性,农药降解

【目的】原核表达茶尺蠖EoCarE592羧酸酯酶(carboxlesterase, CarE)基因EoCarE592，并探讨重组蛋白对农药的降解能力。【方法】构建原核表达载体 pET-32a-EoCarE592，转化大肠杆菌Escherichia coliBL21异源表达，SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白，并对包涵体蛋白变复性；通过固蓝B盐比色法的含量标准曲线测定重组EoCarE592酶活性以及温度、pH和金属离子对酶活性的影响；利用气相色谱检测EoCarE592在30 ℃pH 7.0和0,4, 8, 12, 16, 20及24 h时对200 mg/L的高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、甲基对硫磷(methyl-parathion)和异丙威(isoprocarb)降解能力。【结果】通过大肠杆菌异源表达得到重组EoCarE592包涵体蛋白，经尿素变复性后得到酶活性29.8 U的重组EoCarE592，其最适温度 30 ℃左右、最适pH 7.0~8.0左右、Mg2+和K+对酶活有促进作用；重组EoCarE592能在30 ℃, pH 7.0, 24 h内对初始浓度为200 mg/L的高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威降解率分别为81.30%, 83.94%和79.83%。【结论】羧酸酯酶EoCarE592能降解高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威，可能参与茶尺蠖的解毒过程。本研究为环境和果蔬中农药残留的降解奠定了基础。

来源：2024年第1期

《昆虫学报》期刊编辑部

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