昆虫学报

作者：高雨晴,马子淇,李真祥,陈珍珍,刘芳华,康志伟,许永玉

单位：1. 山东农业大学植物保护学院, 泰安 271018; 2. 河北大学生命科学学院, 保定 071000

关键词：豌豆蚜,内参基因,稳定性,实时荧光定量PCR,表达分析

【目的】本研究旨在通过对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum内参基因在不同实验条件下的表达稳定性进行评估，为豌豆蚜基因表达分析奠定基础。【方法】利用qPCR测定昆虫常用14种候选内参基因(EF1α, Tubulin, NADH, RPL12, SDHB, 18S rRNA, 28S rRNA, 16S rRNA, ATPase, Actin, TATA, RPL32, GAPDH和RPL7)在豌豆蚜不同发育阶段(1-4龄若蚜和成蚜)、有翅和无翅孤雌成蚜、孤雌无翅成蚜不同组织(头、胸和腹)、不同地理种群(美国种群、甘肃种群、云南种群和德令哈种群)的孤雌无翅成蚜、不同寄主植物(苜蓿、三叶草和蚕豆)饲养的孤雌无翅成蚜、不同光周期(24L∶0D, 0L∶24D和16L∶8D)下饲养的孤雌无翅成蚜、不同温度(4, 18和35 ℃)下饲养的孤雌无翅成蚜和吡虫啉(200 g/L)处理下孤雌无翅成蚜中的表达量；利用RefFinder, ΔCt法, GeNorm, NormFinder和BestKeeper对上述14种内参基因表达稳定性进行分析；以CYP6CY3为靶标基因，探究不同内参基因对其在吡虫啉(200 g/L)处理下孤雌无翅成蚜中表达量分析的影响。【结果】依据qPCR检测结果，通过RefFinder对ΔCt法, GeNorm, NormFinder和BestKeeper结果的综合分析显示，在不同生物条件下(发育阶段、翅型、组织、地理种群和寄主植物)，18S rRNA和GAPDH是表达最稳定的内参基因，而16S rRNA和Actin的表达稳定性最差。在非生物条件下(光周期、温度和杀虫剂)，18S rRNA和EF1α的表达最稳定，而Tubulin和TATA的表达稳定性最差。基于GeNorm最佳内参基因数分析和不同内参基因对靶标基因CYP6CY3表达影响的分析，推荐使用2个表达最稳定内参基因18S rRNA和EF1α用于豌豆蚜的进一步研究。【结论】在豌豆蚜qPCR分析中，推荐同时使用18S rRNA和EF1α作为内参基因。

来源：2023年第5期

《昆虫学报》期刊编辑部

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