昆虫学报

作者：王紫馨,许雅静,张文德,张凯遥,吴鹰,刘佳美,朱乐冉,牛庆生,赵红霞,陈大福,郭睿

单位：1. 福建农林大学动物科学学院蜂学学院, 福州 350002; 2. 福建省蜂疗研究所, 福州 350002;3. 吉林省养蜂科学研究所, 吉林 132000; 4. 广东省科学院动物研究所, 广州 510260

关键词： ,意大利蜜蜂,幼虫,肠道,ame-miR-14,靶基因,调控,发育

【目的】本研究旨在揭示ame-miR-14在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道发育过程的调控作用。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中的表达和序列真实性。饲喂ame-miR-14的模拟物(mimic-ame-miR-14)和抑制物(inhibitor-ame-miR-14)及其相应的阴性对照mimic-NC和inhibitor-NC对ame-miR-14分别进行过表达和敲降，利用RT-qPCR检测意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ame-miR-14的表达量。利用生物信息学软件预测ame-miR-14的靶基因并进行相关分析。利用RT-qPCR检测ame-miR-14的过表达和敲降后其靶基因FoxO和Hedgehog在4-6日龄幼虫肠道中的相对表达量。【结果】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中真实存在和表达。相较于饲喂mimic-NC，饲喂mimic-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中均为显著上调；相较于饲喂inhibitor-NC，饲喂inhibitor-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中皆为显著下调。ame-miR-14共靶向309个基因，可注释到45条KEGG通路和36个GO条目；进一步分析发现ame-miR-14可靶向14个生长发育相关基因，并与FoxO和Hedgehog之间存在潜在的靶向关系。过表达ame-miR-14后，相较于mimic-NC组，mimic-ame-miR-14组的4日龄幼虫肠道内FoxO表达量下调，5和6日龄幼虫肠道内FoxO表达量均为显著下调；敲降ame-miR-14后，相较于inhibitor-NC组，inhibitor-ame-miR-14组4日龄幼虫肠道内FoxO表达量下调，5日龄幼虫肠道内FoxO表达量显著上调，6日龄幼虫肠道内FoxO表达量上调。与mimic-NC组相比，过表达ame-miR-14后mimic-ame-miR-14组的Hedgehog表达量在4-6日龄幼虫肠道内皆显著下调；与inhibitor-NC组相比，敲降ame-miR-14后inhibitor-ame-miR-14组的Hedgehog表达量在4-6日龄幼虫肠道内均为上调。【结论】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在和表达；通过饲喂模拟物和抑制物能够分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-14的有效过表达和敲降；ame-miR-14通过负调控FoxO和Hedgehog的表达潜在参与调节幼虫肠道发育。

来源：2023年第1期

《昆虫学报》期刊编辑部

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