昆虫学报

作者：孟昆,胡旭昊,石柳柳

单位：1. 湖北医药学院附属太和医院, 湖北十堰 442000; 2. 湖北医药学院基础医学院, 湖北十堰 442000

关键词：果蝇,细胞凋亡,caspase,Strica,原核表达,多克隆抗体

【目的】细胞凋亡是真核生物中保守的细胞程序化死亡，由蛋白酶caspase介导。Strica是果蝇Drosophila中一个特殊的caspase，至今未有其商品化抗体且生化功能未知。本研究旨在通过克隆、原核表达纯化果蝇Strica蛋白并制备其多克隆抗体来初步研究其功能。【方法】根据果蝇Strica的基因序列构建原核表达载体并转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞，表达Strica蛋白；将表达纯化后的Strica蛋白免疫家兔制备多克隆抗体；通过间接ELISA和Western blot分别测定抗体效价和灵敏度；利用前期构建的过表达载体pAc5-V5-Strica进行转染果蝇S2细胞，设计合成siRNA进行RNAi验证该抗体的特异性；利用该抗体通过免疫荧光实验检测Strica在果蝇S2细胞中的亚细胞定位；利用该抗体通过Western blot实验探究放线菌酮(10 μg/mL)处理后果蝇S2细胞中Strica蛋白的激活状态。【结果】获得了果蝇Strica重组蛋白；ELISA检测Strica抗体的效价大于1∶25 600；Western blot鉴定该抗体在1∶10 000的稀释度下能与重组蛋白反应；该抗体可以检测到S2细胞中过表达以及内源性Strica蛋白；Strica蛋白在S2细胞质中呈现散点分布；放线菌酮介导Strica蛋白的切割激活。【结论】成功制备了兔抗果蝇Strica多克隆抗体。Strica响应凋亡刺激物放线菌酮激活，推测Strica参与果蝇的细胞凋亡过程。本研究为进一步深入研究Strica的功能奠定了实验基础。

来源：2022年第11期

《昆虫学报》期刊编辑部

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