昆虫学报

作者：张凯遥,刘佳美,张文德,胡颖,康育欣,王紫馨,王思懿,钱加珺,赵萧,张佳欣,陈大福,郭睿,付中民

单位：1. 福建农林大学动物科学学院蜂学学院, 福州 350002; 2. 福建农林大学蜂疗研究所, 福州 350002

关键词：意大利蜜蜂,miRNA,ame-miR-79,幼虫,肠道,发育,靶基因

【目的】本研究旨在通过饲喂ame-miR-79的模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道内的ame-miR-79分别进行过表达和敲减，探究ame-miR-79对幼虫肠道内靶基因表达的调控作用。【方法】通过分子克隆与Sanger测序验证意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-79的序列真实性。通过饲喂mimic-miR-79和inhibitor-miR-79对意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道内的ame-miR-79分别进行过表达和敲减。采用相关生物信息学软件进行ame-miR-79的靶基因预测与分析。通过RT-qPCR检测ame-miR-79的过表达和敲减效果及过表达和敲减ame-miR-79后靶基因的相对表达量。【结果】ame-miR-79在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在。与无义模拟物(nonsense mimic, mimic-NC)组相比，mimic-miR-79组的4-6日龄幼虫肠道内ame-miR-79的表达量皆极显著上调；与无义抑制物(nonsense inhibitor, inhibitor-NC)组相比，inhibitor-miR-79组的4和5日龄幼虫肠道内ame-miR-79的表达量显著下调，6日龄幼虫肠道内ame-miR-79的表达量极显著下调。ame-miR-79共靶向303个基因，涉及27个GO条目和179条KEGG通路。相较于mimic-NC组，靶基因细胞色素P450基因CYP450在mimic-miR-79组的4和5日龄幼虫肠道内均极显著下调表达，而在6日龄幼虫肠道内上调表达；靶基因fringe糖基化转移酶(fringe glycosyltransferase, FG)基因在4日龄幼虫肠道内下调表达，在5日龄幼虫肠道内显著下调表达，而在6日龄幼虫肠道内上调表达。相较于inhibitor-NC组，CYP450在inhibitor-miR-79组的4日龄幼虫肠道内极显著上调表达，在6日龄幼虫肠道内上调表达，而在5日龄幼虫肠道内下调表达；FG的表达水平在4日龄幼虫肠道内显著上调，在5和6日龄幼虫肠道内极显著上调。【结论】ame-miR-79在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在；通过饲喂模拟物和抑制物能分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-79的有效过表达和敲减；ame-miR-79负调控意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内CYP450和FG的表达。

来源：2022年第10期

《昆虫学报》期刊编辑部

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