昆虫学报

作者：陈秋应,杨喜,游东蕊,杨沐,徐志峰,肖伟

单位：1. 西南大学植物保护学院, 昆虫学及害虫控制工程重点实验室, 重庆 400715; 2. 西南大学农业科学研究 院, 重庆 400715

关键词：桃蛀螟,性信息素结合蛋白,表达模式,昼夜节律,原核表达,荧光竞争结合实验

【目的】本研究旨在对桃蛀螟Conogethes punctiferalis性信息素结合蛋白CpunPBP3进行鉴定和定性分析，完善对桃蛀螟性信息素感受机制的理解。【方法】扩增、分析桃蛀螟CpunPBP3的cDNA序列，并与其他草螟科昆虫的同源蛋白氨基酸序列进行比较。利用qRT-PCR测定桃蛀螟不同日龄雄成虫触角中CpunPBP3的表达量变化，以及该基因表达的昼夜波动；以性信息素反-10-十六碳烯醛(E10-16∶Ald)(150 ng)和顺-10-十六碳烯醛(Z10-16∶Ald)(6 ng)对雄成虫进行诱导，并检测诱导后24 h内不同时间节点时触角中CpunPBP3的表达量。构建重组表达载体pET-30a(+)/CpunPBP3，通过大肠杆菌Escherichia coli表达获得重组蛋白，并通过荧光竞争实验检测纯化重组蛋白CpunPBP3与上述2种性信息素成分的结合能力。【结果】系统发育分析结果显示，CpunPBP3与已经鉴定的桃蛀螟PBP基因CpunPBP2和CpunPBP5分布在不同分支中,但与其他昆虫物种的PBP基因亲缘关系较近；qRT-PCR结果表明，雄成虫触角中CpunPBP3的表达量在羽化后0-8 d呈先升高后下降的趋势，24 h光周期内17∶00时的表达量显著高于1∶00时的，其余时间节点间的表达量无显著差异；150 ng的E10-16∶Ald诱导3和6 h后的表达量显著下降，6 ng的Z10-16∶Ald诱导6和24 h后的表达量显著增加。荧光竞争结合实验结果表明，CpunPBP3重组蛋白与性信息素E10-16∶Ald和Z10-16∶Ald均有强结合能力，Ki值分别为9.267和8.656 μmol/L。【结论】本研究明确了CpunPBP3的核苷酸和氨基酸序列及其表达模式，能够响应性信息素的诱导而表达，而且CpunPBP3重组蛋白能够很好地结合性信息素，表明CpunPBP3是桃蛀螟的一条性信息素结合蛋白。

来源：2021年第3期

《昆虫学报》期刊编辑部

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