昆虫学报

作者：张嘉俊,何兴菲,张婷婷,司风玲,陈斌,何正波

单位：重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所, 媒介昆虫重庆市重点实验室, 重庆 401331

关键词：中华按蚊,气味结合蛋白,基因克隆,原核表达,人体气味物质,结合能力

【目的】克隆中华按蚊Anopheles sinensis气味结合蛋白2(odorant binding protein 2, OBP2)基因AsinOBP2，分析该基因的表达及其重组蛋白与人体气味物质的结合能力。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆AsinOBP2的全长cDNA序列，通过qPCR分析AsinOBP2基因在中华按蚊不同发育时期(雌雄蛹及羽化后第0, 1, 2, 3, 6和9天的成虫)、3日龄成虫不同嗅觉组织(触角、喙和下颚须)和吸血前后3日龄雌成虫中的表达水平；通过原核表达和亲和层析，表达并纯化AsinOBP2重组蛋白，运用荧光竞争结合实验测定重组蛋白AsinOBP2与39种人体气味物质的结合能力。【结果】克隆并测序了AsinOBP2的全长cDNA序列(GenBank登录号: MT700441)，其开放阅读框长492 bp，编码163个氨基酸，N末端30个氨基酸为信号肽序列，具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸结合位点，属于Classic亚家族成员。qPCR结果显示，AsinOBP2在中华按蚊羽化后的表达水平逐渐增强，羽化后第6天表达水平最高，随后开始下降；AsinOBP2主要在雌成蚊触角中表达；吸食血液后3日龄雌成虫中AsinOBP2的表达水平显著下降。荧光竞争结合实验显示，在测定的39种人体气味物质中，重组蛋白AsinOBP2与12种化合物具有结合活性，其中与吲哚结合能力较强，解离常数Ki=27.15 μmol /L，其次是与正丙胺、2-甲基丁醛和葵醛，解离常数Ki分别为42.49, 48.33和47.90 μmol /L。【结论】根据AsinOBP2基因的表达特点及其重组蛋白与人体气味物质的结合能力，后者表明AsinOBP2对人体气味物质具有明显的选择结合特性，我们推断AsinOBP2在雌蚊追寻宿主的行为中起着重要的作用。

来源：2021年第2期

《昆虫学报》期刊编辑部

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