昆虫学报

作者：路一平,霍春月,马田田,杨宗霖,申雅文,阚云超,李丹丹

单位：1. 郑州大学生命科学学院, 郑州 450001; 2. 南阳师范学院, 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室, 河南南阳 473061

关键词：家蚕,非编码RNA,组织,过表达载体,体腔显微注射

【目的】通过体腔显微注射非编码RNA(non-coding RNA, ncRNA)过表达载体，研究注射后ncRNA在家蚕Bombyx mori幼虫不同组织中的表达情况，探索研究家蚕ncRNA功能的便捷方法。【方法】利用显微注射仪(玻璃显微注射针)在家蚕5龄第3天幼虫第7-8腹节褶皱处分别注射家蚕ncRNA Bm-15和Bm-152过表达载体piggyBac［A3-EGFP-A3-Bm-15］和piggyBac［A3-EGFP-A3-Bm-152］，注射48 h后提取家蚕幼虫头、胸、尾部、腹部背板、腹部腹板和丝腺总RNA，荧光定量PCR检测Bm-15和Bm-152在家蚕幼虫不同组织中的表达情况。【结果】采用玻璃显微注射针造成的创伤面小，注射后家蚕出现感染和死亡的比例低于10%。注射ncRNA Bm-15过表达载体后，在家蚕幼虫头部和尾部都检测到Bm-15的显著性过表达，头部中Bm-15表达量较注射piggyBac［A3-EGFP］空载体时上升了17倍，在其他4个组织中Bm-15表达量与正常饲养组家蚕对照相比变化不显著。注射Bm-152过表达载体后，同样在家蚕幼虫头部和尾部都检测到Bm-152的显著过表达，其中头部中的表达量较注射piggyBac［A3-EGFP］空载体时上升了6.6倍。腹部背板和丝腺中Bm-152过表达效果也较明显，分别是注射piggyBac［A3-EGFP］空载体时表达量的3.4和4.5倍。【结论】体腔显微注射ncRNA过表达载体可以实现ncRNA在家蚕头部中稳定过表达。本研究为后续研究神经相关ncRNA的功能提供了较好的思路和方法。

来源：2019年第7期

《昆虫学报》期刊编辑部

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