昆虫学报

作者：张洋逸,黄伟峰,何楠,李佳欢,陈文锋,黄少康

单位：1. 福建农林大学蜂学学院, 福州 350002; 2. 福州大学生命科学研究所, 福州 350108

关键词：西方蜜蜂,东方蜜蜂微孢子虫,组织透明化技术,肠道,激光共聚焦显微镜,原位杂交

【目的】以西方蜜蜂Apis mellifera工蜂肠道为例探究组织透明化技术——丙烯酰胺交联替换脂质透明硬化成像/免疫染色/原位杂交兼容组织水凝胶(clear lipid-exchanged acrylamide-hybridized rigid imaging/immunostaining/in situ hybridization-compatible tissue-hYdrogel, CLARITY)在昆虫组织上的应用，确定CLARITY与荧光原位杂交(FISH)相结合在昆虫肠道组织透明化中的适用性。【方法】依照CLARITY技术操作程序，用水凝胶固定西方蜜蜂肠道，并以被动方式透明化，再用靶向东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae 16S rRNA带异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记和靶向真核细胞18S rRNA带Texas RED标记的寡核苷酸荧光探针进行肠道组织的荧光原位杂交，然后用DAPI(蓝色)进行细胞核复染，通过激光共聚焦显微镜观察透明化的染色组织。【结果】首次成功将西方蜜蜂肠道组织透明化。在激光共聚焦显微镜下，观察到马氏管的原始分布形态，以及东方蜜蜂微孢子虫在中肠末端分布更密集的空间分布特征，并实现了对肠道组织的3D重构。【结论】CLARITY能应用于蜜蜂肠道组织透明化，透明化组织能进行原位杂交和激光共聚焦观察。CLARITY和FISH相结合免除抗体制备和石蜡切片的麻烦，直观展示肠道内部的真实状态，为昆虫生理病理研究提供了一种可靠特异的标记方法。

来源：2019年第6期

《昆虫学报》期刊编辑部

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