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国内刊号：11-1832/Q
国际刊号：0454-6296
发布日期:
作者：顾健健,刘红玲,李凯荣,孟紫旺,王慧娟,沈关望,张宇靖,阮杨,林英,夏庆友
单位：1. 西南大学, 家蚕基因组生物学国家重点实验室, 重庆 400716; 2. 蚕桑学重庆市重点实验室, 重庆 400716; 3. 西南大学生物技术学院, 重庆 400716
关键词：家蚕,细胞,简单基础启动子,双荧光素酶报告基因系统,转录调控,转录元件
【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子，从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响，为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的能在家蚕细胞中稳定表达且基本不含上游转录调控元件的BmVgP78M启动子的基础上，通过PCR技术在其上游添加一定长度的间隔序列和能够应答20-羟基蜕皮激素(20E)且增强启动子活性的BrC-Z2转录因子结合基序(BrC-Z2 element, BrC-Z2E)；通过基因克隆技术构建细胞转染载体；通过细胞转染技术和双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性的变化。【结果】通过在BmVgP78M启动子上游添加28 bp间隔序列，成功构建了一个简单基础启动子，命名为VgP78ML，并证明其为可用于研究目标转录调控元件的简单基础启动子。经实验验证表明，该简单基础启动子不仅可以在家蚕细胞中稳定表达，且其本身活性不受20E及转录因子BrC-Z2的影响；当该启动子上游连接BrC-Z2E时，可以显著地应答20E及BrC-Z2转录因子，从而调控报告基因的表达。【结论】VgP78ML能够作为简单基础启动子应用于细胞水平对家蚕基因转录调控进行研究。同时,其构建方法也为其他物种构建研究转录调控的简单基础启动子提供了参考。
来源：2019年第4期
《昆虫学报》期刊编辑部
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