昆虫学报

作者：孙娜,丁伟峰,刘志刚,张欣,李娴,冯颖

单位：中国林业科学研究院资源昆虫研究所, 国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室, 昆明 650233

关键词：柑橘凤蝶,单细胞克隆,重组杆状病毒,重组蛋白,简单重复序列区间

【目的】研究柑橘凤蝶Papilio xuthus细胞系RIRI-PX1的单细胞克隆株RIRI-PX1-C24的生物学和重组蛋白表达特性。【方法】用野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(wild-type Autographa californica multiple nucleopolyhedrosis virus, wt-AcMNPV)侵染RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1，检测细胞对野生型病毒的敏感性；使用重组绿色荧光蛋白杆状病毒(AcMNPV-GFP)、重组β-半乳糖苷酶杆状病毒(AcMNPV-Gal)以及重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP)分别侵染细胞系RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1，在之后的24, 48, 72, 96, 120, 144和168 h检测3种重组蛋白的表达量；通过简单重复序列区间(inter simple sequence repeat, ISSR)标记比较RIRI-PX1-C24与RIRIPX1的遗传相似性。【结果】亲本细胞系 RIRI-PX1和克隆株RIRI-PX1-C24均能被wt-AcMNPV侵染，其中RIRI-PX-C24对wt-AcMNPV的敏感性较RIRI-PX1有显著提高。3种重组蛋白均能在2个细胞系中表达，其中重组绿色荧光蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平远高于在亲本细胞系RIRI-PX1中的表达水平，但重组β-半乳糖苷酶蛋白和重组分泌型碱性磷酸酶蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平较在RIRI-PX1中的无显著提高。用10条ISSR引物进行的RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1 2个细胞系的指纹图谱分析中，4条引物扩增条带在这2个细胞系间存在差异；2个细胞系的遗传相似性范围在0~83.33%之间，说明克隆株及其亲本细胞系在基因型上存在差异。【结论】通过对柑橘凤蝶细胞系RIRI-PX1进行单细胞克隆，确实获得了使重组绿色荧光蛋白表达水平有显著提高的克隆株RIRI-PX1-C24，其利用价值仍需进一步的研究。

来源：2019年第3期

《昆虫学报》期刊编辑部

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